La estación IVITA-Maranganí, FMV-UNMSM, ubicada en el distrito de Maranganí, provincia de Canchis, Cusco, viene funcionando desde fines de los años 50. Se dedica a la investigación básica, adaptativa y extensiva para mejorar la rentabilidad y competitividad de los sistemas de producción de la ganadería altoandina, de forma que es un referente en la investigación científica de camélidos, pues en esta estación se ha generado el 80% del conocimiento al respecto.

En los últimos años, la incorporación de nuevas técnicas de evaluación y diagnóstico clínico han experimentado grandes avances en los métodos de análisis celular; sin embargo, en los laboratorios de la estación falta la renovación de muchos equipos. Dentro de estos, uno de los más importantes es el citómetro de flujo, por sus características especiales como técnica de análisis celular, lo que ha hecho que en la última década su uso se haya extendido de forma rápida, desde los laboratorios de investigación básica hasta los laboratorios clínicos. Así, se ha constituido un complemento valioso de las técnicas clásicas utilizadas para el estudio de la morfología, biología y bioquímica celular, tanto como para la inmunología, hematología, oncología, anatomía patológica y biología celular. La conjugación de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribución de determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular, lo que ha permitido identificar subpoblaciones celulares.

De esta forma, en el campo de la reproducción de los camélidos, desde el IVITA y junto con otras instituciones venimos trabajando en la conservación de los espermatozoides, en forma refrigerada o congelada, pero sin buenos resultados hasta el momento. Al evaluar toda la metodología de trabajo, para conocer dónde está el error, todos coincidimos en que las técnicas de evaluación seminal empleadas datan de 50 años atrás, lo que ocasiona que no estemos conociendo los cambios fisiológicos que ocurren en los espermatozoides durante la refrigeración y congelación. Ante esta situación, el FONDECYT, a través del proyecto de Equipamiento Científico 2018-01, está apoyando la implementación de un laboratorio de citometría de flujo, con la compra de un citómetro de última generación y otros equipos complementarios. El fin es conocer los cambios que ocurren en la integridad y funcionalidad de la membrana plasmática y acrosomal, actividad mitocondrial, ADN espermático y la peroxidación lipídica en la membrana plasmática. El conocimiento de estos parámetros nos permitirá identificar los mejores

dilutores y protocolos de congelación de semen de los camélidos, para así contribuir a mejorar los porcentajes de fertilidad en la inseminación artificial.

En el área de sanidad, el equipamiento nos servirá para caracterizar de mejor manera la morfología y funcionabilidad de las células sanas y dañadas por diferentes enfermedades infecciosas, parasitarias, metabólicas, carenciales, entre otras; así como también nos permitirá diferenciar la funcionabilidad de respuestas inflamatorias producidas por agentes virales, bacterianos y parasitarios que a la fecha no fueron descritos por técnicas modernas de última generación, como lo hará el citómetro de flujo.

Hasta el momento en el sur del Perú ninguna institución cuenta con servicio de citometría, las muestras colectadas en las zonas altoandinas se procesan en Lima o fuera del país, en donde el tiempo de transporte altera las características celulares, por lo que los resultados no son confiables. Con el servicio de citometría que brindará el IVITA-Maranganí, se mejorará la calidad de la enseñanza e investigación que se realiza en nuestra institución, UNA-Puno, UNSAAC-Cusco, UNAMBA-Apurímac y otras universidades del sur, en la realización de tesis de pre y postgrado y de otras instituciones como los hospitales de la región Cusco y Puno.

Objetivo general

Mejorar la calidad de enseñanza e investigación para incrementar el conocimiento y generar nuevas tecnologías en la ganadería altoandina del país. Ello contribuirá en la formación de profesionales, técnicos y especialistas para mejorar la calidad de vida del poblador altoandino y posicionar al IVITA-Maranganí como centro referente de enseñanza e investigación.

Objetivo específico 1

Adquisición del equipo y puesta en marcha

Objetivo específico 2

Validación de la citometría de flujo para la evaluación de espermatozoides de camélidos en el laboratorio de reproducción del IVITA-Maranganí

Descripción

La estación IVITA-Maranganí, FMV-UNMSM, ubicada en el distrito de Maranganí, provincia de Canchis, Cusco, viene funcionando desde fines de los años 50, dedicada a la investigación básica, adaptativa y extensiva para mejorar la rentabilidad y competitividad de los sistemas de producción de la ganadería altoandina, de forma que es un referente en la investigación científica de camélidos, pues en esta Estación se ha generado el 80% del conocimiento sobre camélidos.

En los últimos años, la incorporación de nuevas técnicas de evaluación y diagnóstico clínico han experimentado grandes avances en los métodos de análisis celular; sin embargo, en los laboratorios de la estación falta la renovación de muchos equipos. Dentro de estos, uno de los más importantes es el citómetro de flujo, por sus características especiales como técnica de análisis celular, lo que ha hecho que en la última década su uso se haya extendido de forma rápida, desde los laboratorios de investigación básica hasta los laboratorios clínicos. Así, se ha constituido un complemento valioso de las técnicas clásicas utilizadas para el estudio de la morfología, biología y bioquímica celular, tanto como para la inmunología, hematología, oncología, anatomía patológica y biología celular. La conjugación de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribución de determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular, lo que ha permitido identificar subpoblaciones celulares.

De esta forma, en el campo de la reproducción de los camélidos, desde el IVITA y junto con otras instituciones venimos trabajando en la conservación de los espermatozoides, en forma refrigerada o congelada, pero sin buenos resultados hasta el momento. Al evaluar toda la metodología de trabajo, para conocer dónde está el error, todos coincidimos en que las técnicas de evaluación seminal empleadas datan de 50 años atrás, lo que ocasiona que no estemos conociendo los cambios fisiológicos que ocurren en los espermatozoides durante la refrigeración y congelación. Ante esta situación, el FONDECYT, a través del proyecto de Equipamiento Científico 2018-01, está apoyando la implementación de un laboratorio de citometría de flujo, con la compra de un citómetro de última generación y otros equipos complementarios. El fin es conocer los cambios que ocurren en la integridad y funcionalidad de la membrana plasmática y acrosomal, actividad mitocondrial, ADN espermático y la peroxidación lipídica en la membrana plasmática. El conocimiento de estos parámetros nos permitirá identificar los mejores dilutores y protocolos de congelación de semen de los camélidos, para así contribuir a mejorar los porcentajes de fertilidad en la inseminación artificial.

En el área de sanidad, el equipamiento nos servirá para caracterizar de mejor manera la morfología y funcionabilidad de las células sanas y dañadas por diferentes enfermedades infecciosas, parasitarias, metabólicas, carenciales, entre otras; así como también nos permitirá diferenciar la funcionabilidad de respuestas inflamatorias producidas por agentes virales, bacterianos y parasitarios que a la fecha no fueron descritos por técnicas modernas de última generación, como lo hará el citómetro de flujo.

Hasta el momento en el sur del Perú ninguna institución cuenta con servicio de citometría, las muestras colectadas en las zonas altoandinas se procesan en Lima o fuera del país, en donde el tiempo de transporte altera las características celulares, por lo que los resultados no son confiables. Con el servicio de citometría que brindará el IVITA-Maranganí, se mejorará la calidad de la enseñanza e investigación que se realiza en nuestra institución, UNA-Puno, UNSAAC-Cusco, UNAMBA-Apurímac y otras universidades del sur, en la realización de tesis de pre y postgrado y de otras instituciones como los hospitales de la región Cusco y Puno.

Institución responsable del equipamiento

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

RUC: 20148092282

Tipo de entidad: Universidad

Régimen: Público

Tipo de organización: Sin fines de lucro

Departamento: Lima

Provincia: Lima

Distrito: Lima

Dependencias: IVITA-Maranganí y Facultad de Medicina Veterinaria

Entidad Colaboradora de interés de uso

Red de Salud Melgar Hospital San Juan de Dios Ayaviri

RUC: 20322628642

Tipo de entidad: Empresa

Régimen: Público

Departamento: Puno

Provincia: Melgar

Distrito: Ayaviri

Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco

RUC: 20172474501

Tipo de entidad: Universidad

Régimen: Público

Departamento: Cusco

Provincia: Cusco

Distrito: Cusco

Instituto de Educación Superior Tecnológico Público Vilcanota

RUC: 20221253389

Tipo de entidad: Instituto de educación superior o escuela de educación superior

Régimen: Público

Departamento: Cusco

Provincia: Canchis

Distrito: Sicuani

Investigador Principal

Nombres: Wilber Calixto Rolando

Apellido paterno: García

Apellido materno: Vera

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Dependencia: IVITA-Maranganí

Coinvestigadores

Nombres: Joel Iván

Apellido paterno: Pacheco

Apellido materno: Curie

Grado académico: Magíster

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Dependencia: IVITA-Maranganí

Nombres: Sergio Danilo

Apellido paterno: Pezo

Apellido materno: Carreón

Grado académico: Magíster

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Dependencia: IVITA-Maranganí

Nombres: José Manuel

Apellido paterno: Angulo

Apellido materno: Tisoc

Grado académico: Magíster

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Dependencia: IVITA-Maranganí

Nombres: Lucio Enrique

Apellido paterno: Ampuero

Apellido materno: Casquino

Grado académico: Doctorado

Dependencia: Facultad de Ciencias Agrarias

Nombres: Julio

Apellido paterno: Málaga

Apellido materno: Apaza

Grado académico: Doctorado

Nombres: Alexei Vicent

Apellido paterno: Santiani

Apellido materno: Acosta

Grado académico: Doctorado

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Dependencia: Facultad de Medicina Veterinaria

Coordinador Administrativo

Nombres: Santiago Adrián

Apellidos: Callo Quispe

Entidad: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Equipamiento mayor

Un equipo mayor es un equipo altamente sofisticado de un valor superior a S/. 600,000.00 que, por la relevancia de su uso en la investigación científica, tiene la capacidad de generar impacto regional y/o nacional en relación con la disponibilidad de tecnología. Así, la adquisición de este equipo permitirá cubrir necesidades de acceso a tecnologías de investigación de alto costo que, por una parte, no se encuentran suficientemente desarrollados y/o por debajo de estándares nacionales y que, por otra parte, aún no se encuentran disponibles en la región o en el país.

Nombre del equipo mayor

Citómetro de flujo

Descripción condiciones técnicas

El citómetro de flujo FACSCanto II de 8 colores, que va ser instalado en el laboratorio de citometría de flujo del IVITA-Maranganí, nos permite la medición de 10 parámetros (Foward Scatter, Side Scatter y ocho colores) y puede ser usado para un amplio rango de determinaciones, tanto para propósitos clínicos como de investigación. Asimismo, ofrece gran versatilidad y reproducibilidad de resultado debido a que posee las siguientes características: a) un módulo sensor (Sensor Unit), que consta de un láser de estado sólido con emisión de 488nm que permite la identificación de hasta cuatro compuestos fluorescentes; b) un láser de He-Ne de 633nm de emisión que permite la lectura de dos compuestos fluorescentes adicionales en forma simultánea; y c) un láser Violeta de 405nm además de la detección del Foward Scatter y el Side Scatter.

Por otro lado, la transmisión de señales se realiza por un sistema de fibra óptica; la detección de señales, mediante sistemas de octágono y trígono que son fotomultiplicadores dispuestos en forma circular, con espejos de refracción que permiten reducir el camino óptico y aumentar la eficiencia del sistema. Así también, cuenta con una unidad FACSCanto Workstation para la adquisición y análisis de datos. Esta unidad está compuesta por una computadora PC HP XW4300 doble procesador de 3GHz, 160 GB de disco rígido, con lectora y grabadora de CD, 2G de memoria RAM con una impresora HP Business Deskjet 2300 o similar y dos monitores LCD de 19” marca NEC. El sistema tiene un software básico para la adquisición y análisis de datos (FACSDiva) así como un sistema para análisis automático de subpoblaciones linfocitarias (FACSCanto Clinical Software) y un programa específico de control de calidad CST (Cytometry Set-up and Tracking).

Con la implementación de un citómetro de flujo en el IVITA-Maranganí se podrán conocer los cambios fisiológicos que ocurren en los espermatozoides de los camélidos sudamericanos durante la refrigeración y congelación. El conocimiento de estos cambios nos permitirá identificar los mejores dilutores y protocolos de congelación de semen de alpacas y llamas, y así contribuir a mejorar los porcentajes de preñez de alpacas inseminadas con semen descongelado. La inseminación artificial con semen congelado será una de las técnicas reproductivas más importante en la producción de los camélidos domésticos y, combinada con una prueba de progenie, contribuirá sustancialmente en el mejoramiento genético de las alpacas y llamas, especialmente cuando se disponga de semen congelado de reproductores de alta calidad genética.

En el área de sanidad, el equipamiento nos servirá para caracterizar de mejor manera la morfología y funcionabilidad de las células sanas y dañadas por diferentes enfermedades infecciosas, parasitarias, metabólicas, carenciales, entre otras; también nos permitirá diferenciar la funcionabilidad de respuestas inflamatorias producidas por agentes virales, bacterianos y parasitarios que a la fecha no fueron descritos por técnicas modernas de última generación (como el citómetro de flujo). Con los nuevos conocimientos adquiridos se mejorará la calidad de la investigación científica y generarán nuevas tecnologías y conocimientos aplicables en la ganadería altoandina del país, los que contribuirán con la formación de profesionales, técnicos y especialistas, así como con la mejoría de la calidad de vida de un millón y medio de personas que se dedican a la crianza de camélidos en la región altoandina del Perú. Las áreas productoras de camélidos en el Perú incluyen las provincias con mayor pobreza y marginalización del poblador altoandino.

Lugar donde se instalará el equipo

El citómetro de flujo se instalará en un ambiente apropiado que estará continuo al laboratorio de andrología que se denominará “Laboratorio de citometria de fujo”. Este poseerá condiciones adecuadas de temperatura, humedad y agua para que funcione adecuadamente, además contará con un profesional que será capacitado por parte de la empresa vendedora del equipo y por parte del proyecto que se hará cargo del manejo y mantenimiento del mismo. Este ambiente estará implementado con los equipos secundarios que se comprarán con el proyecto; de igual manera, este laboratorio será parte de los laboratorios que tenemos en el Instituto Veterinario de Investigaciones Tropicales y de Altura (IVITA)-Maranganí, perteneciente a la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, que trabaja por más de 50 años en la zona realizando investigación en camélidos y es líder en investigación y transferencias de tecnología en la zona de donde trabajamos. Las oficinas administrativas y laboratorios están ubicadas en el valle del Vilcanota, en la calle Lima 106 del distrito de Maranganí (3650 m s.n.m.), provincia de Canchis, departamento de Cusco, a 150 km de la ciudad de Cusco (carretera Cusco-Puno).

Equipamiento secundario

Un equipo secundario es aquel que asegura el correcto funcionamiento y operatividad del equipo mayor. Estos equipos pueden ser necesarios para la preparación de muestras, para que el ambiente esté controlado, entre otras condiciones. Ej.: termocicladores, cámaras de flujo laminar, aire acondicionado, estabilizadores de energía, computadoras, etc.

Nombre del equipo secundario

Micro-osmómetro automático

Descripción:

Este micro-osmómetro permite incorporar hasta 20 muestras de 20 microlitros. Estas pueden analizarse de una en una o en grupos de 20, dependiendo de la demanda. La versatilidad en el procesamiento de muestras permite analizar muestras acuosas complejas como sangre, suero, orinas, medios de cultivo, fórmulas magistrales y muchos otros tipos. Así, el micro-osmómetro puede ser utilizado en una variedad de aplicaciones de laboratorio que incluyen formulaciones, control de procesos industriales, medio ambiente y control de la calidad del producto terminado; además del diagnóstico clínico, especialmente de muestras pediátricas.

Nombre del equipo secundario

Set de laparoscopia para uso veterinario-ovinos

Descripción:

El laparoscopio es un instrumento quirúrgico que sirve para realizar la inseminación intrauterina de las muestras de semen descongelados, que mejor calidad presentaron al analizar con el citómetro de flujo, en las alpacas.

Nombre del equipo secundario

Refrigeradora vertical

Descripción:

El refrigerador tiene una puerta de vidrio que permite una visión general del interior. Además, posee un controlador avanzado que garantiza la máxima seguridad; y un ventilador interior, que crea enfriamiento forzado de aire, lo cual garantiza temperaturas estables y confiables.

Nombre del equipo secundario

Micropipeta unicanal de rango variable

Descripción:

Las pipetas están provistas de un contador analógico que muestra el volumen de pipeteo. El ajuste del volumen se hace girando en la dirección adecuada el botón del pulsador de pipeteo o el botón de ajuste negro. El rango de volúmenes se muestra en el pulsador de pipeteo.

Nombre del equipo secundario

Ultra congeladora de 120 l (-60 / -86°c)

Descripción:

La ultra congeladora de 120 l (-60 / -86°c) conserva las muestras de espermatozoides, células sanguíneas rojas y blancas, muestras de tejidos y soluciones que se utilizarán en el análisis con el citómetro de flujo

Nombre del equipo secundario

Microcentrífuga de alta velocidad

Descripción:

La microcentrífuga de alta velocidad centrifuga muchas muestras antes de realizar las analíticas en el citómetro de flujo

Nombre del equipo secundario

Centrífuga multipropósito refrigerada

Descripción:

La centrifuga multipropósito refrigerada centrifuga muestras biologías a temperatura corporal o temperatura que indica el protocolo

Nombre del equipo secundario

Termómetro RTD con sonda pt 100

Descripción:

El Termómetro RTD con sonda pt 100 mide las temperaturas de diferentes soluciones o muestras biológicas.

Nombre del equipo secundario

Incubadora de cultivo 53 lt in-55 80ºc

Descripción:

Equipo diseñado para estudios microbiológicos de cultivos de tejidos y la incubación de virus, incubación de espermatozoides de diferentes especies.

Nombre del equipo secundario

Sistema purificador de agua tipo I

Descripción:

La gama de equipos Ultramatic Plus suministran agua ultra pura de máxima calidad, superan las especificaciones de la normativa ASTM para agua tipo I, parte de agua purificada (tipo II, destilada u osmotizada). Incorporan las más altas tecnologías en la producción y control de la calidad del agua ultra pura obtenida. Características: técnicas de calidad del agua producida: tipo I.

Nombre del equipo secundario

Destilador de agua de 8 l/h

Descripción:

Destilador automático y de producción continua. Incorpora un depósito de almacenamiento del agua resultante con capacidad de 16 litros. Refrigerante y con elementos calefactores en acero inoxidable. Excelente calidad de destilación. Mecanismo de seguridad que desconecta los calefactores al disminuir la presión del agua de refrigeración y conecta de nuevo al recuperarse. Al llenarse el depósito de acumulación de agua resultante se interrumpe la actividad del equipo y se reinicia a medida que se consume. Posee termostato que protege al aparato en caso de sobrecalentamiento; grifo dispensador del agua destilada; y limitador de caudal de agua de red, lo que optimiza el caudal al mínimo imprescindible.

Nombre del equipo secundario

Pulsado eléctrico (electroeyaculador electrojac 6 – Wireless remote control)

Descripción:

Destilador automático y de producción continúa. Incorpora un depósito de almacenamiento del agua resultante con una capacidad de 16 litros. Refrigerante y con elementos calefactores en acero inoxidable. Excelente calidad de destilación. Mecanismo de seguridad que desconecta los calefactores al disminuir la presión del agua de refrigeración y conecta de nuevo al recuperarse. Al llenarse el depósito de acumulación de agua resultante se interrumpe la actividad del equipo y se reinicia a medida que se consume. Posee termostato que protege al aparato en caso de sobrecalentamiento; grifo dispensador del agua destilada; y limitador de caudal de agua de red, lo que optimiza el caudal al mínimo imprescindible.

Nombre del equipo secundario

Agitador vórtex

Descripción:

El agitador vórtex V-1 plus es un instrumento ideal para mezclar suavemente y lograr un resuspensión contundente de las células y los componentes de líquidos químicos y biológicos en tubos. Ello mediante el uso de un mecanismo excéntrico.

Nombre del equipo secundario

Termobloque dual (dry bath) (EL-02)

Descripción:

La incubadora de baño seco Elite está diseñado para una variedad de aplicaciones, incluyendo digestión de restricción, ADN desnaturalizante, BUN, agar de fusión, estudios de coagulación, hibridación y reacción termociclada de arranque en caliente. Elite Dry Bath es reconocido como el más fino, posee el calentamiento más rápido y la incubadora de baño de impresión de pies más pequeños. Además, los bloques de aluminio se pueden retirar para el uso de un mini baño de agua o un baño de cuentas.

Nombre del equipo secundario

Incubadora de baño seco Genius

Descripción:

La incubadora de baño seco Genius tiene un controlador con microprocesador que ofrece selección fácil de temperatura, calentamiento rápido y excelente estabilidad. La temperatura puede ser fijada en incrementos de 0.1 °C a 5 °C, por encima de la temperatura del ambiente, hasta 150 °C. Un sensor de temperatura opcional está disponible para colocar directamente en las muestras. Un temporizador que se puede establecer entre 1-999 mins.

La serie Genius puede ser utilizada como mini baño de agua. El software opcional de control de funciones permite que la incubadora de baño seco lleve a cabo la grabación de datos en tiempo real a través de una computadora.

Nombre del equipo secundario

Agitador magnético con placa caliente

Descripción:

Diseñado para una variedad de aplicaciones, incluyendo las siguientes: digestión de restricción, desnaturalización del ADN, el BUN, derretimiento del agar, estudios de coagulación, hibridación y reacción de ciclo térmico de arranque caliente, incubación de espermatozoides y otras células.

Nombre del equipo secundario

Equipo de ecografía portátil

Descripción:

Gracias a un teclado excelentemente concebido se puede acceder con facilidad y rapidez a las funciones más importantes durante la realización del diagnóstico. La disposición especial de las teclas hace que el ultra sonógrafo sea un cómodo instrumento de trabajo, tanto para las personas que examinen trabajando con la mano derecha como con la izquierda. Su espléndido menú permite la utilización de muchas funciones prácticas de la ecografía. La abundante memoria interna permite la grabación y la proyección de imágenes y de cine loops en el aparato.

Proyección de uso

En el Laboratorio de citómetria de flujo se procesarán y analizarán las muestras de los diferentes laboratorios de la

estación; proyectos de investigación de las universidades de Cusco, Puno, Arequipa y Apurímac; hospitales de la zona sur del país; y otras instituciones. El citómetro funcionará 6 horas diarias, 120 horas semanales, y un total de 1440 horas anuales, de las cuales se utilizará para los trabajos del IVITA 720 horas anuales (50%); mientras que para las universidades de Cusco, Puno, Arequipa, Apurímac, hospitales y otras instituciones 720 horas anuales (50%).

Adquisición de un analizador genético de 24 capilares AB 3500XL para el fortalecimiento de las actividades de caracterización molecular de los vertebrados acuáticos como base para la implementación del ADN ambiental (eDNA) en la Amazonía peruana

Tipo de proyecto: Investigación aplicada

Sectores: Agropecuario

Tipo de sector: General

Área de conocimiento OCDE: Ciencias agrícolas

Sub área de conocimiento OCDE: Ciencias veterinarias

Disciplina de conocimiento OCDE: Ciencias veterinarias

Departamento: Cusco

Provincia: Canchis

Distrito: Maranganí

Descripción

Para el análisis de la respuesta de los espermatozoides de alpaca a diferentes protocolos de crioconservación, mediante citometría de flujo y CASA, se desarrollará los siguientes experimentos:

• Primero, se determinará el diluyente control de congelación.
• Segundo, se determinará el crioprotector y temperatura de equilibrio en la crioconservación.
• Tercero, se evaluará la curva de enfriamiento en la congelabilidad.
• Cuarto, se estudiará la substitución del crioprotector de origen animal.
• Quinto, se evaluará la optimización del protocolo de crioconservación.

Con los mejores dos tratamientos que se obtengan se inseminarán 120 alpacas hembras. La colecta de semen será, por el método post-copula. Tras recolectar los eyaculados, y valorar su motilidad y volumen, serán mezclados (pool) y se diluirán con diluyente básico: Tris-Ac., Cítrico-Fructuosa y 20 % v/v de yema de huevo fresco y dividido en las alícuotas requeridas en cada experimento.

Las alícuotas de las distintas suspensiones serán refrigeradas a 5 ºC durante 1.5 h. A esa temperatura se combinará con el dilutor básico más glicerol, obteniéndose una concentración final de 5% de glicerol y se dejará estabilizar por 20 min para envasar las muestras en pajuelas de 0.5 ml y congelar en vapores de nitrógeno y sumergidas en él hasta su descongelación (60» a 3 ºC). Los parámetros cinéticos en fresco, tras la descongelación, serán analizados

mediante el sistema CASA. Para evaluar la viabilidad, integridad de las membranas espermáticas, actividad mitocondrial y ADN, en fresco y tras la descongelación, se utilizará el citómetro de flujo.

La Estación IVITA-Maranganí, pertenece a la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Las oficinas administrativas y laboratorios están ubicados en el valle del Vilcanota, distrito de Maranganí (3650 m s.n.m.), provincia de Canchis, departamento de Cusco, a 150 km de la ciudad de Cusco (carretera Cusco-Puno). Cuenta con campos experimentales ubicados en el Centro de Investigación en Camélidos Sudamericanos La Raya-CICAS UNSAAC, 4200 m s.n.m. (límite Cusco-Puno), y el fundo San Marcos, en el distrito de Maranganí.

El IVITA-Maranganí realiza trabajos de investigación en camélidos, docencia y transferencia de tecnologías en las áreas de mejoramiento de praderas nativas, alimentación y nutrición, producción, enfermedades infecciosas y parasitarias, mejoramiento genético, reproducción, y estudio en las ciencias básicas desde 1962. Para este fin cuenta con personal altamente capacitado con publicaciones en revistas indexadas a nivel nacional e internacional, en diferentes áreas de la producción animal. Adicionalmente, cuenta con laboratorios equipados, dedicados a la generación de tecnologías en función a la demanda de los criadores.

El IVITA-Maranganí, para la formación y capacitación en producción de camélidos sudamericanos, trabajará con productores individuales, comunidades campesinas alpaqueras, asociaciones de productores, empresas asociativas, municipios, gobiernos regionales y algunas ONG. De esa forma generará tecnologías adecuadas para una mejor calidad de vida del poblador andino. De igual manera, en investigación trabajará en alianza estratégica con docentes y laboratorios de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM y con otras instituciones nacionales como la Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco, la Universidad Andina Cusco, la Universidad Nacional del Altiplano de Puno, la Universidad Nacional Micaela Bastidas de Apurímac, la Universidad Nacional de Juliaca, la Universidad Jorge Basadre Grohmann de Tacna, el INIA-Quinsachata; así como instituciones internacionales tales como las siguientes: Universidad Autónoma de Barcelona-España, Universidad politécnica de Valencia-España, Universidad de Buenos Aires-Argentina, Universidad Nacional de Tucumán-Argentina y el CITA-España. Con ello se logrará mejorar la calidad de los trabajos que se desarrollarán en biotecnología reproductiva, mejoramiento genético, sanidad animal y bienestar animal.

Asimismo, el Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico y de Innovación Tecnológica (FONDECYT), a través del proyecto de Equipamiento Científico 2018-01, va a financiar con 1,349,959 soles al sub proyecto “Análisis Mediante Citometría de Flujo y CASA de la Respuesta de los Espermatozoides de Alpaca a Diferentes Protocolos de Crioconservación” para la compra de un citómetro de flujo y equipos secundarios que, por sus características especiales como técnica de análisis celular, han hecho que en la última década su uso se haya extendido de forma rápida desde los laboratorios de investigación básica hasta los laboratorios clínicos. Constituyendo, así, un complemento valioso de las técnicas clásicas utilizadas para el estudio de la morfología, biología y bioquímica celular, tanto también como para la inmunología, hematología, oncología, anatomía patológica y biología celular. La conjugación de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribución de determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular, lo que ha permitido identificar subpoblaciones celulares.